本制品是一种添加了高安全性绿色荧光染料NadGreen的DNA上样缓冲液,用于琼脂糖凝胶电泳时DNA、RNA等核酸样品的荧光染色和上样,核酸的荧光染色可以在与上样缓冲液混合的瞬间完成。
本上样缓冲液以溴酚蓝为指示剂,稀释至1×后比重仍然较大,上样便捷、极易下沉,且颜色清晰可见。溴酚蓝的电泳的位置与200~500bp的DNA的电泳位置相近,在染色观察200~500bp DNA时,溴酚蓝可能对这些DNA片段的观察有一定干扰。如果溴酚蓝对所需要观察的条带有干扰,请使用6×DNA上样缓冲液(LoadRed,绿色荧光)。
本制品使用便捷,染色上样一步完成:本制品中NadGreen的浓度经过优化,使用时直接加入适量本制品到核酸样品中混匀即可进行上样和电泳,无须在凝胶配制时加入任何核酸染料或者在电泳后进行染色,上样、染色同步进行,使用特别便捷。本制品安全、灵敏度高、稳定性好:本制品中使用的NadGreen具有安全(致突变性极低且检测不到显著的细胞毒性)、灵敏度高(可检测低至0.6ng的DNA)、稳定性好(热稳定性和光稳定性好)等优点。本制品的灵敏度效果参考图1。图1.不同量DNA样品使用本制品的效果图。实际效果会因DNA质量、检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。本制品可以使用和SYBR Green或EB相同的荧光检测体系:使用本制品染色后在约500nm波长蓝光(也可以使用约260nm紫外光)激发呈现绿色荧光,适用于原先使用SYBR Green或SYBR Gold为核酸染料的凝胶成像和检测系统,例如对人体无害的蓝光灯或蓝光成像仪。对于原来用于EB染料观察的系统,可以考虑选用使用含NadRed红色核酸染料的6×DNA上样缓冲液(溴酚蓝,红色荧光)或6×DNA上样缓冲液(LoadRed,红色荧光),但也可以使用本制品。使用本制品并且用EB的紫外检测体系时,检测灵敏度会比使用NadRed染料的产品低约4~5倍。对于既可以观察EB也可以观察SYBR Green的具有紫外和蓝光两种激发光的凝胶成像系统,则推荐直接使用本制品。组分2mL10mL6×DNA上样缓冲液(溴酚蓝,绿色荧光)2×1mL10×1mL说明书1份1份保存:2~8℃,避光,有效期1年。本制品作为荧光染料须避光保存,但在使用过程中的常规室内光照不会影响其使用效果。本制品可直接加入DNA样品中进行上样和电泳。电泳之后的琼脂糖凝胶不建议重复使用。电泳后的凝胶通常直接使用凝胶成像设备进行观察即可。如果发现背景偏高,也可以使用不含核酸酶的水洗涤背景。本制品不仅可以染色双链DNA,也可染色单链DNA和RNA。如果观察到条带弥散或者分离不理想,请尝试以下方法:使用新鲜配制的电泳缓冲液、降低核酸的上样量、降低琼脂糖浓度、选用更长的凝胶、降低电泳电压一倍以上并延长凝胶电泳时间以改善电泳效果、使用更薄的梳齿等。本制品兼容常用的电泳缓冲液,例如TAE和TBE。使用本制品时,宜配套使用FluoView DNA Ladder(绿色荧光,货号:YTB7156/YTB7158/YTB7151/YTB7153),或者把已有的添加了常规上样缓冲液的DNA ladder和FluoView绿色荧光染料(50×)配套使用。本制品和DNA ladder配套使用的效果图参考图2。图2.不同长度的PCR产物样品使用本制品,并使用FluoView DNA Ladder(0.2~12kb,绿色荧光)的电泳效果图。
配制合适浓度的琼脂糖凝胶。注:不需要添加任何核酸染料。将本制品适当混匀,然后按照每5μL样品加入1μL 6×DNA上样缓冲液,混匀后,直接进行上样和电泳即可。注:溴酚蓝的电泳的位置与200~500bp的DNA的电泳位置相近,在染色观察200~500bp DNA时,溴酚蓝可能对这些DNA片段的观察有一定干扰。如果溴酚蓝对所需要观察的条带有干扰,请使用6×DNA上样缓冲液(LoadRed,绿色荧光)。电泳后,推荐使用凝胶成像仪进行观察或拍照。相关搜索:6×DNA上样缓冲液(溴酚蓝,绿色荧光),DNA上样缓冲液,DNA上样液,RNA上样缓冲液,琼脂糖凝胶电泳,绿色荧光核酸染料,含核酸染料,溴酚蓝,NadGreen